海水鱼类与淡水鱼类在水产养殖中的应用有何不同
0 2024-11-05
3、病理学变化
PRRS缺乏特征性的病理变化,感染毒株的毒力不同,其病理变化也不一样。在临床上显现期和濒死期主要表现为急性败血症。一般来说患急性PRRS的猪,肺脏呈红褐花斑状,不塌陷,感染部与健康部界线不明显,常出现在肺前腹侧;淋巴结中度到重度肿大,腹股沟淋巴结最明显;胸腔内有大量的清亮的液体。显微镜下可见弥漫性间质性肺炎并伴有嗜中性粒细胞浸润,全身性的巨噬细胞和血管内皮细胞肿大、活化或增生;广泛性的微循环障碍和非化脓性脑炎等病理变化。这些变化中,新生仔猪最明显,其次是哺乳仔猪,然后是断奶后肥育猪。
4、现代实验室检验诊断
⑴病毒的分离
病毒分离是有效诊断PRRS的方法,但对用过弱毒疫苗的猪场需要对分离物做进一步的鉴定,没有用过弱毒疫苗的猪场也有可能通过带毒或其他途径感染疫苗毒,而疫苗毒比强毒株更能适应细胞培养。PRRSV分离最好采集病猪的死胎或病猪的肺、脾、心、肾、脑、淋巴结、扁桃体、腹水、胸腺和骨髓匀浆制成悬液,经双抗和病毒过滤器处理后,接种猪原代肺泡巨噬细胞(PAM)或Marc145细胞。初次分离时不出现细胞病变或病变不明显,盲传几代后可出现典型的特征性病变:细胞变圆,聚集成堆,并呈灶状脱落。此外,该病毒对温度和pH很敏感,所以在样品保存和运输时要特别注意。但由于整个试验的周期长,费用高,因而不适用于临床诊断,主要用于实验室研究。
⑵抗原检测
①荧光标记单株抗体法:使用该方法可检查患猪肺、脾组织切片,检测PRRS病毒抗原所在位置。
②反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法:本法具有敏感、特异、快速、简便、准确等优点,已广泛用于某些RNA病毒的检测。其技术路线是:病毒培养→提纯病毒粒子→抽提病毒RNA→设计引物→RT-PCR→琼脂糖凝胶电泳→测序。目前RT-PCR已广泛应用于PRRSV的鉴定和临床诊断,可以检测血液、及组织样品中的病毒核酸,感染后24小时可检出病毒核酸,而血清学试验要在感染后9天左右才能检出,RT-PCR敏感性更高,还能准确反映持续染个体的实际带毒状态,其扩增的目的片段也主要是针对PRRSV的核衣壳蛋白基因。RT-PCR提供了一种良好的可替代细胞培养检测PRRSV的方法。利用特异性引物进行RT-PCR还可以区分不同基因型的PRRSV毒株。