水牛的采取冷冻颗粒长期保存，是一种先进技术，它能够充分发挥优良种畜的性能优势，使其不受寿命、地点的限制，一头优良公牛一年可供5000头母牛配种用精，比本交提高上百倍。

1水牛冷冻颗粒理论根据

精子是具有生命活力的性细胞，结构比较复杂，精子在－0.6℃以下至－30℃时，细胞间隙的水分结成冰晶，使细胞脱水，原生质变干，造成精子死亡。另外，大的冰结晶对精子造成机械损伤，使原生质的表层破坏失去保护作用，冰晶渗入精子内部，破坏精子的结构，使精子不能复苏。但是，水的结晶只能在一定温度范围内才能形成，如果低于该温度范围就形成玻璃化体，按照玻璃化学说，原生质发生玻璃化对细胞影响较小，如果快速升温，玻璃化可越过结晶态而直接变为液态，不致于损害精子细胞的结构而使精子死亡。

根据上述原理，在水牛的颗粒冷冻的制作过程中，快速越过冰晶危险区的温度（－60℃至－40℃），才能使冷冻取得好的效果。

2水牛冷冻颗粒的制作

2.1采精方法用假采精法，将黄牛用的假截短，由50cm截至35cm，内胎由67cm截至46cm，改集精杯为胶漏斗接上10～15ml茶色刻度离心管。优点：A、操作方便，减少精子和假的接触，使精子少受外界不利因素的影响;B、收集快;C、可直接看出量。

2.2采精频率采精频繁，每次的量和浓度降低;采精次数过少，采得的衰老精子多，不能利用，以每月采精10～13次比较合理。

2.3的品质检查检查要迅速，要求浓度在每毫升含精子10亿以上，活力在0.7级以上，精子畸形率不得超出15%。

2.4稀释稀释液要有营养，抗菌、抗冷和适当的pH值（6.4～6.8），相等的渗透压。1号液：12%蔗糖77ml，3ml，蛋黄20ml，青霉素10万单位，链霉素10万单位;2号液：14%乳糖75ml，5ml，蛋黄20ml，青霉素10万单位，链霉素10万单位。稀释倍数按照稀释后每毫升含有精子3～4亿为原则。

2.5平衡衡释后，进行镜检，如和衡释前相比无变化，可将盛瓶用棉塞封口，再用4～8层纱布包好，放在装有冰块的广口保温瓶中平衡3～4小时，使精子有一段适应低温的时间，并使保护剂渗入精细胞内，产生抗冻作用。

2.6颗粒制作

2.6.1滴冻前镜检：经过平衡的，在滴冻前要进行一次镜检，如精子活力和平衡前差异大而又达不到0.6级以上不进行滴冻。

2.6.2制粒方法：将盛有7成满液氮的广口保温瓶放好，在液氮面上放一铝盒，将铝盒盖翻盖在铝盒上，再接上量温感应器，直测盒盖的温度，当温度达到－90℃至－130℃，方可滴冻。将经过平衡和镜检达到滴冻标准的存放广口保温瓶放在方便操作处，不要取出瓶，防止升温，用预冷好的滴管吸取，每滴0.1ml，快速滴冻，然后进行1～2分钟熏蒸、脱粒、浸入液氮。再进行解冻镜检，如活力在0.3级以上，收入液氮中保存。继续进行滴冻，要求滴冻速度快，手压滴管的胶球用力要均匀，逐步向内压，不得放松。否则，进入空气，出现气泡。

2.6.3收粒保存：冻完后收入液氮罐小提筒中可做长期保存，在收存中要注意颗粒暴露在空气中时间不能长。经过试验，用塑料瓶存放颗粒比提筒好，可从小瓶上方钻孔进入液氮，取用方便，又可保持颗粒不暴露在空气中。

2.7解冻

2.7.11号解冻液：柠檬酸钠2.9g，蒸馏水100ml;2号解冻液：柠檬酸钠1.7g，蔗糖1.15g，碳酸氢钠0.09g，氨苯磺胺0.3g，磷酸二氢钾0.325g，蒸馏水100ml，青霉素10万单位，链霉素10万单位。以上两种解冻液，2号解冻液解冻后保存时间较长，可以运到站点输精，1号解冻液可用于随时解冻随时使用。

2.7.2解冻温度：取1毫升解冻液，注入经过消毒的青霉素小瓶内，放在45℃水中预热，当瓶内温度达到40℃～45℃时，放入一粒冷冻颗粒，不断摇动使之融化。镜检精子活力，如达到0.3级以上便可输精。

2.8颗粒冷冻的运输冷冻颗粒用10立升的液氮缺罐运输，在提取时要填好标签，注明品种、牛耳号、冷冻时间等，运输过程中不能振动、碰击，要存放牢固、通风、防烈日照晒。

3水牛冷冻的应用

3.1适时输精信阳水牛一年四季都发情，但有明显的淡旺季之分，一般3～8月份发情较多，其他月份较少。配种年龄一般控制在2.5岁。发情周期平均为25天。每次发情持续时间为1.5～3天。一般在发情45小时后开始输精，此时母牛性欲已消失，子宫颈充血肿胀已减退，子宫颈口待关闭，黏液量减少，实践证明在此时输精受胎率高。

3.2输精方法我场多采取直肠把握子宫颈输精法，此法简便、易于操作，可直接输到子宫深部，使不易倒流，通过直肠触摸不会因误配引起流产，用此种方法输精受胎率高。